脑出血患者体液免疫功能变化及其临床意义
陈红芳 王香梅 罗建勤 郑昭景 吴仁娣 徐瑞龙
【摘要】 目的 观察脑出血患者体液免疫功能的变化及其临床意义。方法 115例脑出血患者中少量出血39例，中等量出血37例，大量出血39例。采用流式细胞仪检测患者静脉血CD19+-CD25+、CD19+-CD25-B淋巴细胞百分比，采用散射比浊法测定免疫球蛋白IgA、IgG、IgM和补体C3水平，同时观察不同脑出血量之间上述指标的变化及急性期、恢复期的动态变化。结果脑出血患者CD19+-CD25+、CD19+-CD25-B淋巴细胞百分比及IgA、IgG、IgM、C3含量均较正常对照组增高(P<0.05或P<0.01)。随着脑出血量的增多，CD19+-CD25 +、CD19+-CD25-B淋巴细胞百分比及IgG、C3亦均呈增高趋势(P均<0.05)；恢复期CD19+-CD25+、CD19+-CD25-B淋巴细胞百分比较急性期均降低(P<0.01和P<0.05)。结论脑出血患者存在体液免疫功能被激活的现象，出血量越多，疾病越严重，体液免疫功能被激活的程度越明显。
, 百拇医药
【关键词】 脑出血； 流式细胞仪； 体液免疫功能
Change in humoral immunological function and their clinical significance in patients with cerebral hemorrhage CHEN Hong-fang, WANG Xiang-mei, LUO Jian-qin, ZHENG Shao-jing, WU Ren-di, XU Rui-long.Jinhua Municipla Central Hospital, Jinhua 321000, Zhejiang, China
OBJECTIVE: To study the changes in humoral immunological function and their clinical significance in cerebral emorrhage. METHODS: Among 115 cases of cerebral hemorrhage, there was low volume bleeding in 39 case, middle volume in 37 cases, and large volume in 39 cases. The ratios of CD19+-CD25+ and CD19+-CD25-B lymphocytes were determined by flow cytometry, and the content of IgA, IgG, IgM, and complement C3 were determined with scattered turbidimetry. The changes in humoral immunological function were compared in patients with different degrees of hemorrhage, and their variation in acute and recovery stages of disease were respectively assessed. RESULTS: The ratios of CD19+-CD25+and CD19+-CD25-B lymphocyte, and the levels of IgA, IgG, IgM, and C3 were higher than those of controlsall P<0.05). The ratios of CD19+-CD25+ and CD19+-CD25- Blymphocyte, and the contents of IgA, IgG,IgM and C3 were increased with the increase in amount of hemorrhage(all P<0.05). The ratios of CD19+-CD25+ and CD19+-CD25-B lymphocytes in recovery stage were lower than those in acute stage (all P<0.05). CONCLUSION: There are activations of humoral immunological functions in cerebral hemorrhage. The more abundant in hemorrhage and the severer in disease, the more prominant in the changes in humoral immunological functions.
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【Key words】 cerebral hemorrhage; flow cytometry； humoral immunity function
为了解脑出血患者体液免疫功能的变化情况，我们采用流式细胞仪和散射比浊法检测了脑出血患者的B淋巴细胞和免疫球蛋白IgA、IgG、IgM及补体C3的含量。
1 资料与方法
1.1 检测对象：115例脑出血患者为本院2003年1月—2004年3月住院治疗者，均经临床和头颅CT检查确诊，排除有明显的感染、免疫性疾病和肿瘤患者。其中男70例，女45例；年龄38~89岁，平均(67.02±12.74)岁；合并高血压77例次，糖尿病12例次，高脂血症25例次。按照多田公式计算出血量，分为少量(出血量<20 ml)、中等量(20 ml≤出血量≤50 ml)及大量(出血量>50 ml)出血。痊愈或好转99例，死亡16例。对照组为同期本院健康体检者40例，其中男25例，女15例；年龄48~80岁，平均(6473±843)岁；伴高血压25例次，糖尿病5例次，高脂血症9例次。脑出血组与对照组之间年龄、基础疾病(高血压、糖尿病、高脂血症)差异无显著性(P均>0.05)，具有可比性。
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1.2 检测方法：于患者急性发病后1~3 d(急性期)任何一日清晨6~7时抽取其空腹静脉血4 ml，其中2 ml用乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na2)抗凝，用流式细胞仪(Coulter EPICS XL型，美国)检测B淋巴细胞，用全自动细胞计数仪(Coulter GEN'S System2)检测全血总淋巴细胞数；另2 ml血用散射比浊法(Beckman ARRAY 360特定蛋白分析仪)检测IgA、IgG、IgM和C3含量。流式细胞仪测定方法：100 μl全血分别加20 μl异硫氰酸(FITC)标记鼠抗人CD19单克隆抗体、20 μl藻红蛋白(PE)标记鼠抗人CD25单克隆抗体(购自美国Coulter公司)和CD45-PC5标记单克隆抗体10 μl，充分混匀，避光静置20 min，然后加入溶血素100 μl，振荡混匀，避光10 min，加入1 ml蒸馏水混匀，避光10 min后在流式细胞仪上以CD45设门，圈取淋巴细胞群进行CD19+-CD25+、CD19+-CD25-的百分比测定。设抗鼠同型抗体为空白对照。部分患者在发病后14~21 d(恢复期)的任何一日再次抽血复查。
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1.3 统计学处理：采用SPSS/PC+软件进行统计学分析，数据表达采用均数±标准差(x±s)，采用t(或t′)检验、方差分析及q检验。
2 结 果
2.1 脑出血急性期患者体液免疫功能与对照组的比较(表1)：CD19+-CD25+、CD19+-CD25-B淋巴细胞百分比以及IgA、IgG、IgM和C3水平均较对照组高，差异均有显著性(P<0.05或P<0.01)，而总淋巴细胞数差异无显著性(P>0.05)。
2.2 脑出血急性期不同脑出血量患者体液免疫功能的比较(表2)：少量与中等量脑出血患者间IgG和C3差异有显著性(P均<0.05)；大量脑出血患者CD19+-CD25+、CD19+-CD25-B淋巴细胞百分比及IgG、C3含量均比中等量、少量脑出血患者增高，差异具有显著性(P均<0.05)。总淋巴细胞数在不同脑出血量患者间差异无显著性(P>0.05)。
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2.3 脑出血恢复期与急性期体液免疫功能的比较(表3)：脑出血恢复期患者CD19+-CD25+、CD19+-CD25-B淋巴细胞百分比均降低，差异均有显著性(P<0.01和P<0.05)，IgA、IgG、IgM、C3含量尽管有所降低，但差异无显著性(P均>0.05)，淋巴细胞总数的改变差异也无显著性(P>0.05)。
3 讨 论
CD19是B淋巴细胞表面的特异抗原，它从前B淋巴细胞即开始表达，一直到B淋巴细胞的活化阶段，所以CD19抗原表达的量能够反映B淋巴细胞的功能。CD25是膜表面含有白细胞介素-2(IL-2)受体的淋巴细胞，有人发现活化的B淋巴细胞表面有CD25抗原表达，故CD19+-CD25-、CD19+-CD25+淋巴细胞数量分别反映了总B淋巴细胞和活化状态的B淋巴细胞数量。活化状态的B淋巴细胞能分泌免疫球蛋白，补体可以被抗原、抗体等激活，C3是补体中最重要的组成部分。朱士文等〔1〕观察到，脑出血患者IgA、IgM、IgG、C3水平均明显增高，且与体内炎症介质肿瘤坏死因子-α和IL-2的升高同步。本研究中观察了115例脑出血患者多项体液免疫指标的变化，结果显示脑出血患者B淋巴细胞百分比及IgA、IgG、IgM、C3含量均较正常对照组显著升高；不同脑出血量患者之间体液免疫功能的比较发现，大量脑出血患者CD19+-CD25+、CD19+-CD25-B淋巴细胞百分比及IgG、C3含量较中等量和少量脑出血患者显著增高，中等量脑出血患者IgG、C3较少量脑出血患者显著增高；脑出血恢复期CD19+-CD25+、CD19+-CD25-B淋巴细胞百分比则较急性期显著下降，总淋巴细胞数、IgA、IgG、IgM、C3也有所降低。表明脑出血患者的体液免疫功能被激活，脑出血量越多、疾病越严重，体液免疫功能被激活的程度也就越明显。多项体液免疫指标中尤以流式细胞仪测定的活化B淋巴细胞变化最灵敏， IgG、C3的改变次之，故流式细胞仪测定的活化B淋巴细胞百分比和IgG、C3的水平可作为脑出血病情轻重的重要参考指标之一。脑出血患者体液免疫功能被激活，可能与应激致下丘脑-垂体-肾上腺轴改变有关〔2〕，李改丽等〔3〕认为，神经系统特别是丘脑下部和交感神经直接参与了免疫调控。由于脑出血会导致患者脑组织结构破坏及缺血、缺氧，这些变化不仅会使神经内分泌系统功能发生紊乱，而且会使神经内分泌免疫调节网络失衡〔1，4〕。丘脑下部或其交感神经径路受到破坏，可引起神经内分泌免疫调节网络反馈抑制减弱，而脑组织的破坏可释放脂-胆固醇脂、脂蛋白等嗜脂质膜成分，二者均可激活中枢神经系统的多克隆B细胞，使免疫球蛋白合成增多。李光勤等〔5〕认为，在脑出血周围有明显的白细胞浸润，浸润的白细胞通过阻塞微循环和释放血管收缩物质减少血流量，分泌蛋白酶、氧自由基等细胞毒性物质损伤组织，且在脑出血前使用抗白细胞黏附药物强力霉素可明显减轻血肿周围的白细胞浸润及脑损害的程度和范围。通过对脑出血患者体液免疫功能的测定，可以看出，脑出血与体液免疫功能异常有着密切的关系，随着神经内分泌免疫调节网络学说的建立，进一步深入该领域的研究，对脑出血的防治具有重要意义。
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参考文献
1 朱士文，王立才，李义召.急性脑血管病患者血清和脑脊液肿瘤坏死因子、白介素及免疫球蛋白水平与免疫功能关系的临床研究〔J〕.中国中西医结合急救杂志，2002，9：38-40.
2 丁玄宙.应激对免疫功能的影响〔J〕.生理科学进展，1989，20：265-267.
3 李改丽，王百忍，鞠躬.出血性卒中与免疫〔J〕.国外医学脑血管疾病分册，2000，8：281-283.
4 曲松滨，徐岩松，王峰.脑梗死急性期患者血中6种神经肽含量观测〔J〕.中国危重病急救医学，2002，14：31.5 李光勤，董为伟.大鼠脑出血周围区白细胞浸润及强力霉素效果的研究〔J〕.中华神经科杂志，1999，32：58-59
作者单位：321000 浙江省金华市中心医院
作者简介：陈红芳(1967-)，女(汉族)，浙江省义乌市人，医学硕士，副主任医师，主要从事脑血管病研究。, 百拇医药
【摘要】 目的 观察脑出血患者体液免疫功能的变化及其临床意义。方法 115例脑出血患者中少量出血39例，中等量出血37例，大量出血39例。采用流式细胞仪检测患者静脉血CD19+-CD25+、CD19+-CD25-B淋巴细胞百分比，采用散射比浊法测定免疫球蛋白IgA、IgG、IgM和补体C3水平，同时观察不同脑出血量之间上述指标的变化及急性期、恢复期的动态变化。结果脑出血患者CD19+-CD25+、CD19+-CD25-B淋巴细胞百分比及IgA、IgG、IgM、C3含量均较正常对照组增高(P<0.05或P<0.01)。随着脑出血量的增多，CD19+-CD25 +、CD19+-CD25-B淋巴细胞百分比及IgG、C3亦均呈增高趋势(P均<0.05)；恢复期CD19+-CD25+、CD19+-CD25-B淋巴细胞百分比较急性期均降低(P<0.01和P<0.05)。结论脑出血患者存在体液免疫功能被激活的现象，出血量越多，疾病越严重，体液免疫功能被激活的程度越明显。
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【关键词】 脑出血； 流式细胞仪； 体液免疫功能
Change in humoral immunological function and their clinical significance in patients with cerebral hemorrhage CHEN Hong-fang, WANG Xiang-mei, LUO Jian-qin, ZHENG Shao-jing, WU Ren-di, XU Rui-long.Jinhua Municipla Central Hospital, Jinhua 321000, Zhejiang, China
OBJECTIVE: To study the changes in humoral immunological function and their clinical significance in cerebral emorrhage. METHODS: Among 115 cases of cerebral hemorrhage, there was low volume bleeding in 39 case, middle volume in 37 cases, and large volume in 39 cases. The ratios of CD19+-CD25+ and CD19+-CD25-B lymphocytes were determined by flow cytometry, and the content of IgA, IgG, IgM, and complement C3 were determined with scattered turbidimetry. The changes in humoral immunological function were compared in patients with different degrees of hemorrhage, and their variation in acute and recovery stages of disease were respectively assessed. RESULTS: The ratios of CD19+-CD25+and CD19+-CD25-B lymphocyte, and the levels of IgA, IgG, IgM, and C3 were higher than those of controlsall P<0.05). The ratios of CD19+-CD25+ and CD19+-CD25- Blymphocyte, and the contents of IgA, IgG,IgM and C3 were increased with the increase in amount of hemorrhage(all P<0.05). The ratios of CD19+-CD25+ and CD19+-CD25-B lymphocytes in recovery stage were lower than those in acute stage (all P<0.05). CONCLUSION: There are activations of humoral immunological functions in cerebral hemorrhage. The more abundant in hemorrhage and the severer in disease, the more prominant in the changes in humoral immunological functions.
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【Key words】 cerebral hemorrhage; flow cytometry； humoral immunity function
为了解脑出血患者体液免疫功能的变化情况，我们采用流式细胞仪和散射比浊法检测了脑出血患者的B淋巴细胞和免疫球蛋白IgA、IgG、IgM及补体C3的含量。
1 资料与方法
1.1 检测对象：115例脑出血患者为本院2003年1月—2004年3月住院治疗者，均经临床和头颅CT检查确诊，排除有明显的感染、免疫性疾病和肿瘤患者。其中男70例，女45例；年龄38~89岁，平均(67.02±12.74)岁；合并高血压77例次，糖尿病12例次，高脂血症25例次。按照多田公式计算出血量，分为少量(出血量<20 ml)、中等量(20 ml≤出血量≤50 ml)及大量(出血量>50 ml)出血。痊愈或好转99例，死亡16例。对照组为同期本院健康体检者40例，其中男25例，女15例；年龄48~80岁，平均(6473±843)岁；伴高血压25例次，糖尿病5例次，高脂血症9例次。脑出血组与对照组之间年龄、基础疾病(高血压、糖尿病、高脂血症)差异无显著性(P均>0.05)，具有可比性。
, 百拇医药
1.2 检测方法：于患者急性发病后1~3 d(急性期)任何一日清晨6~7时抽取其空腹静脉血4 ml，其中2 ml用乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na2)抗凝，用流式细胞仪(Coulter EPICS XL型，美国)检测B淋巴细胞，用全自动细胞计数仪(Coulter GEN'S System2)检测全血总淋巴细胞数；另2 ml血用散射比浊法(Beckman ARRAY 360特定蛋白分析仪)检测IgA、IgG、IgM和C3含量。流式细胞仪测定方法：100 μl全血分别加20 μl异硫氰酸(FITC)标记鼠抗人CD19单克隆抗体、20 μl藻红蛋白(PE)标记鼠抗人CD25单克隆抗体(购自美国Coulter公司)和CD45-PC5标记单克隆抗体10 μl，充分混匀，避光静置20 min，然后加入溶血素100 μl，振荡混匀，避光10 min，加入1 ml蒸馏水混匀，避光10 min后在流式细胞仪上以CD45设门，圈取淋巴细胞群进行CD19+-CD25+、CD19+-CD25-的百分比测定。设抗鼠同型抗体为空白对照。部分患者在发病后14~21 d(恢复期)的任何一日再次抽血复查。
, http://www.100md.com
1.3 统计学处理：采用SPSS/PC+软件进行统计学分析，数据表达采用均数±标准差(x±s)，采用t(或t′)检验、方差分析及q检验。
2 结 果
2.1 脑出血急性期患者体液免疫功能与对照组的比较(表1)：CD19+-CD25+、CD19+-CD25-B淋巴细胞百分比以及IgA、IgG、IgM和C3水平均较对照组高，差异均有显著性(P<0.05或P<0.01)，而总淋巴细胞数差异无显著性(P>0.05)。
2.2 脑出血急性期不同脑出血量患者体液免疫功能的比较(表2)：少量与中等量脑出血患者间IgG和C3差异有显著性(P均<0.05)；大量脑出血患者CD19+-CD25+、CD19+-CD25-B淋巴细胞百分比及IgG、C3含量均比中等量、少量脑出血患者增高，差异具有显著性(P均<0.05)。总淋巴细胞数在不同脑出血量患者间差异无显著性(P>0.05)。
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2.3 脑出血恢复期与急性期体液免疫功能的比较(表3)：脑出血恢复期患者CD19+-CD25+、CD19+-CD25-B淋巴细胞百分比均降低，差异均有显著性(P<0.01和P<0.05)，IgA、IgG、IgM、C3含量尽管有所降低，但差异无显著性(P均>0.05)，淋巴细胞总数的改变差异也无显著性(P>0.05)。
3 讨 论
CD19是B淋巴细胞表面的特异抗原，它从前B淋巴细胞即开始表达，一直到B淋巴细胞的活化阶段，所以CD19抗原表达的量能够反映B淋巴细胞的功能。CD25是膜表面含有白细胞介素-2(IL-2)受体的淋巴细胞，有人发现活化的B淋巴细胞表面有CD25抗原表达，故CD19+-CD25-、CD19+-CD25+淋巴细胞数量分别反映了总B淋巴细胞和活化状态的B淋巴细胞数量。活化状态的B淋巴细胞能分泌免疫球蛋白，补体可以被抗原、抗体等激活，C3是补体中最重要的组成部分。朱士文等〔1〕观察到，脑出血患者IgA、IgM、IgG、C3水平均明显增高，且与体内炎症介质肿瘤坏死因子-α和IL-2的升高同步。本研究中观察了115例脑出血患者多项体液免疫指标的变化，结果显示脑出血患者B淋巴细胞百分比及IgA、IgG、IgM、C3含量均较正常对照组显著升高；不同脑出血量患者之间体液免疫功能的比较发现，大量脑出血患者CD19+-CD25+、CD19+-CD25-B淋巴细胞百分比及IgG、C3含量较中等量和少量脑出血患者显著增高，中等量脑出血患者IgG、C3较少量脑出血患者显著增高；脑出血恢复期CD19+-CD25+、CD19+-CD25-B淋巴细胞百分比则较急性期显著下降，总淋巴细胞数、IgA、IgG、IgM、C3也有所降低。表明脑出血患者的体液免疫功能被激活，脑出血量越多、疾病越严重，体液免疫功能被激活的程度也就越明显。多项体液免疫指标中尤以流式细胞仪测定的活化B淋巴细胞变化最灵敏， IgG、C3的改变次之，故流式细胞仪测定的活化B淋巴细胞百分比和IgG、C3的水平可作为脑出血病情轻重的重要参考指标之一。脑出血患者体液免疫功能被激活，可能与应激致下丘脑-垂体-肾上腺轴改变有关〔2〕，李改丽等〔3〕认为，神经系统特别是丘脑下部和交感神经直接参与了免疫调控。由于脑出血会导致患者脑组织结构破坏及缺血、缺氧，这些变化不仅会使神经内分泌系统功能发生紊乱，而且会使神经内分泌免疫调节网络失衡〔1，4〕。丘脑下部或其交感神经径路受到破坏，可引起神经内分泌免疫调节网络反馈抑制减弱，而脑组织的破坏可释放脂-胆固醇脂、脂蛋白等嗜脂质膜成分，二者均可激活中枢神经系统的多克隆B细胞，使免疫球蛋白合成增多。李光勤等〔5〕认为，在脑出血周围有明显的白细胞浸润，浸润的白细胞通过阻塞微循环和释放血管收缩物质减少血流量，分泌蛋白酶、氧自由基等细胞毒性物质损伤组织，且在脑出血前使用抗白细胞黏附药物强力霉素可明显减轻血肿周围的白细胞浸润及脑损害的程度和范围。通过对脑出血患者体液免疫功能的测定，可以看出，脑出血与体液免疫功能异常有着密切的关系，随着神经内分泌免疫调节网络学说的建立，进一步深入该领域的研究，对脑出血的防治具有重要意义。
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参考文献
1 朱士文，王立才，李义召.急性脑血管病患者血清和脑脊液肿瘤坏死因子、白介素及免疫球蛋白水平与免疫功能关系的临床研究〔J〕.中国中西医结合急救杂志，2002，9：38-40.
2 丁玄宙.应激对免疫功能的影响〔J〕.生理科学进展，1989，20：265-267.
3 李改丽，王百忍，鞠躬.出血性卒中与免疫〔J〕.国外医学脑血管疾病分册，2000，8：281-283.
4 曲松滨，徐岩松，王峰.脑梗死急性期患者血中6种神经肽含量观测〔J〕.中国危重病急救医学，2002，14：31.5 李光勤，董为伟.大鼠脑出血周围区白细胞浸润及强力霉素效果的研究〔J〕.中华神经科杂志，1999，32：58-59
作者单位：321000 浙江省金华市中心医院
作者简介：陈红芳(1967-)，女(汉族)，浙江省义乌市人，医学硕士，副主任医师，主要从事脑血管病研究。, 百拇医药